attP-PhiC31定点插入
attP-PhiC31定点插入技术在2014年开始应用到果蝇转基因中,可以将外源基因插入到特定果蝇的基因组中特定的位点。
技术特点:
◉ 将外源序列插入到特定果蝇基因组中特定的attP位点,获得表型稳定的转基因品系;
◉ 芳景生物拥有十几种有效的attP果蝇供选择,覆盖X,2,3号染色体多个位点以方便重组;
◉ 芳景生物提供全套的载体构建服务,客户可根据课题需求进行定制化服务。
果蝇中的attP-PhiC31整合系统由3部分构成(如图1):
1) PhiC31整合酶:普遍被转入到果蝇基因组上,从而让果蝇胚胎自身表达提供整合酶;
2) attP果蝇品系:通过转座酶随机插入技术,获得带有attP位点的果蝇品系;
3) 带有attB序列的donor质粒DNA:包含attB位点,筛选标记和需要整合到基因组上的目的片段。
芳景生物制作了可插入CDS,promoter,enhancer等多种类型序列的定点载体,并插入了果蝇研究常用的序列元件,可以非常便捷的进行目的载体构建,如:
常用调控序列:5~20×UASt,LexAop,QUAS,UASp,SV40,P10,K10等;
常用基因:GAL4,GAL80,LexA,p65AD,GAL4DBD,QF,QS,GS,FLP等。
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图1. attP-PhiC31转基因示意图